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    荧光双重JBO电竞APP下载苹果版试剂盒

    货号:G1225

    品牌:Servicebio

    价格:¥3000

    规格:

    附件下载地址: ×

    产品简介:

      该试剂盒适用于石蜡切片免疫荧光双重JBO电竞APP下载苹果版,既可用于相同来源抗体的双染, 也可用于不同来源抗体的双染。其主要原理是利用酪酰胺信号放大(TSA)技术, 在 HRP 的作用下,荧光素标记的信号增强剂在能够与抗原结合,通过微波处理去除结合的一抗二抗,但不会影响荧光素标记的增强剂与抗原的结合,因此不会 与后加入的一抗二抗发生交叉反应,从根本上解决了荧光同源双标串色的问题。此外还能够放大阳性信号,提高低丰度蛋白的检测效果。

    包装内容:

    产品货号
    产品名称
    规格
    G1225-1
    A 液:信号增强剂(FITC 标记)
    50μL
    G1225-2
    B 液:信号增强剂(CY3 标记)
    50μL
    G1225-3
    C 液:稀释液
    20ml
    G1225-4
    D 液:封闭液 1
    20ml
    G1225-5
    E 液:封闭液 2
    20ml
    G1225-6
    F 液:DAPI
    20ml
    G1225-7
    G 液:自发荧光淬灭剂
    20ml
    G1225-8
    H 液:抗荧光淬灭封片剂
    20ml

    保存条件:

      整套试剂 4℃避光保存,有效期 3 个月。

    客户自备试剂:

      1.0.01mol/L pH7.4 的 PBS 缓冲液。

      2.HRP 标记二抗(同源双标一个二抗,异源双标相同来源的两个二抗)。

    使用方法:

    第一抗体孵育:

      1.脱蜡、水化组织切片;

      2.根据所应用的一抗的特殊要求,对组织切片进行抗原修复;

      3.PBS 洗 3 次,每次 5 分钟

      4.加入 100μL D 液孵育 10 分钟,阻断内源性过氧化物酶,以减少非特异性背景JBO电竞APP下载苹果版;

      5.PBS 洗 3 次,每次 5 分钟,组化笔画圈;

      6.加入 100μL E 液孵育 30 分钟来减少非特异性JBO电竞APP下载苹果版(血清封闭);

      7.甩掉 E 液,加第一个一抗(一抗浓度按照抗体说明书建议浓度降低 5-10 倍配制,配制好的一抗工作液置于离心机中 12000 转离心 5 分钟,滴加一抗时, 吸取上层的,底部的 30μL 舍弃不用),避光湿盒 4℃过夜孵育;

      8.PBS 洗 3 次,每次 5 分钟;

      9.加入配制的 HRP 标记二抗(针对第一个一抗),室温孵育 50 分钟;

      10.PBS 洗 3 次,每次 5 分钟;

      11.加入 100 μL 用 C 液稀释的信号增强剂 A 或者 B 工作液(A 液或 B 液:C 液=1:500。 配制好的信号增强剂工作液,至于 12000 转离心 5 分钟,吸取上层的,底部 30 μL 舍弃不用),避光湿盒室温孵育 10 分钟;

      12.PBS 洗 3 次,每次 5 分钟;

    第二抗体孵育:

      1.超纯水洗 2 次,每次 5 分钟;

      2.将切片放入盛有抗原修复液的修复盒内进行微波处理,维持 95℃以上温度15 分钟,自然冷却至室温;

      3.PBS 洗 3 次,每次 5 分钟;

      4.加入 100μL E 液孵育 10 分钟;

      5.甩掉 E 液,加第二个一抗(一抗浓度按照抗体说明书建议浓度降低 5-10 倍配制,配制好的一抗工作液置于离心机中 12000 转离心 5 分钟,滴加一抗时, 吸取上层的,底部的 30μL 舍弃不用),避光湿盒 4℃过夜孵育;

      6.PBS 洗 3 次,每次 5 分钟;

      7.加入配制的 HRP 标记二抗(针对第二抗体的),室温孵育 50 分钟;

      8.PBS 洗 3 次,每次 5 分钟;

      9.加入 100μL 用 C 液稀释的信号增强剂 B 或者 A 工作液(A 液或 B 液:C 液=1:500。 配制好的信号增强剂工作液,至于 12000 转离心 5 分钟,吸取上层的,底部 30 μL 舍弃不用)室温孵育 10 分钟;

      10.PBS 洗 3 次,每次 5 分钟;

      11.加入 100μL F 液 DAPI 染核,室温孵育 5 分钟;

      12.超纯水冲洗,加入 100μL G 液,孵育 5 分钟,淬灭组织自发荧光;

      13.流水冲洗 20 分钟(勿正对组织);

      14.滴加 100μL H 液,50mm×50mm 盖玻片封片。

    注意事项:

      1.实验操作应避光进行(暗环境);

      2.PBS洗涤要充分,减少非特异性着色;

      3.一抗浓度按说明书推荐浓度降低5-10倍稀释;

      4.实验操作过程中避免组织干片;

      5.试剂现配现用。

    常见问题及解决方案:

    分类
    可能原因
    优化方案
     
    无阳性信号
    抗体效价低
    安排对照实验,确认一抗二抗效果
    抗原修复偏弱
    提高抗原修复强度
     
     
    阳性信号弱
    抗体浓度低
    提高一抗浓度
    抗原修复偏弱
    提高抗原修复强度
    增强剂孵育时间短
    延长增强剂的孵育时间
     
     
    非特异性着色多
    抗体浓度过高
    降低抗体浓度
    增强剂孵育时间过长
    缩短增强剂的孵育时间
    封闭效果不佳
    延长试剂D,E 的孵育时间

    图例:

    大鼠脑 NEUN(绿光)+MBP(红光)

    H 睾丸癌 CD68(绿光)+CD8(红光)

    大鼠脑 GFAP(绿光)+NEUN(红光)

    H 肾 α-SMA(绿光)+CD31(红光)

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