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  • 免疫组化/荧光

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    肌纤维分型JBO电竞APP下载苹果版试剂盒(荧光标记法)

    货号:G1227-100T

    品牌:Servicebio

    价格:¥3000

    规格:

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      产品简介:

      肌纤维可以分为慢肌纤维(Slow Skeletal Myosin)和快肌纤维(Fast Myosin Skeletal)两大类。这两类肌纤维因其内部构造不同,功能上有很大差异。快肌纤维又称II型纤维、白肌纤、快解醣纤维或快缩肌纤维,属于运动性运动神经单位,快肌纤维含较多的肌原纤维,运动时收缩的速度快而有力,爆发力强,但持久力较差。快肌纤维主要由无氧代谢提供短期能量。慢肌纤维也叫I型纤维、红肌纤维、慢氧化纤维。慢肌纤维收缩速度慢、收缩力量小,在力量与爆发力方面逊色与快肌纤维, 但持续时间长、不易疲劳,主要靠有氧代谢产生的三磷酸腺苷供能。

      本试剂盒使用不同的抗体分别标记慢肌纤维和快肌纤维,可实现I型肌纤维和II型肌纤维的分型。


      包装内容:

    产品货号
    产品名称
    规格
    G1227-1
    Rabbit Anti-Fast Myosin Skeletal Heavy chain antibody
    50 μL
    G1227-2
    Mouse Anti-Slow Skeletal Myosin Heavy chain antibody
    50 μL
    G1227-3
    CY3标记山羊抗兔IgG
    25 μL
    G1227-4
    Alexa Fluor® 488标记山羊抗小鼠IgG
    25 μL
    G1227-5
    抗荧光淬灭封片剂
    5 mL
     

      保存条件:

      整套试剂-20℃避光保存,有效期12个月。


      客户自备试剂:(以下试剂均可向本公司购买)

      1.抗原修复缓冲液(pH 6.0),货号G1201/G1202。

      2.PBS (pH 7.2-7.4),货号G0002。

      3.牛血清白蛋白(BSA),货号G5001。

      4.DAPI,货号G1012。

      5.组织自发荧光淬灭剂,货号G1221。


      使用方法:

      1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ15 min-二甲苯Ⅱ15 min-无水乙醇Ⅰ5 min-无水乙醇Ⅱ5 min-85%酒精5 min-75%酒精5 min-蒸馏水洗。

      2、抗原修复:组织切片置于盛满柠檬酸抗原修复缓冲液(pH 6.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火8 min至沸,停火8 min,再转中低火7 min,,此过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5 min。

      3、画圈血清封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止抗体流走),甩干PBS,滴加BSA,封闭30 min。

      4、加一抗(两种一抗混合孵育):Anti-Fast Myosin Skeletal Heavy chain antibody(稀释比1:100-1:200)和Anti-Slow Skeletal Myosin Heavy chain antibody(稀释比1:100-1:200),两种一抗,按照一定的稀释比例进行混合配制并混匀,轻轻甩掉切片上的封闭液,在切片上滴加稀释好的一抗,切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)

      5、加二抗(两种二抗混合孵育):玻片置于PBS中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。CY3标记山羊抗兔IgG(稀释比1:400);Alexa Fluor®488标记山羊抗小鼠IgG(稀释比1:400),两种二抗按照稀释比例进行混合配制并混匀。 切片稍甩干后在圈内滴加二抗覆盖组织,避光室温孵育50 min。

      6、DAPI复染细胞核:玻片置于PBS中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液,避光室温孵育10 min。

      7、淬灭组织自发荧光:玻片置于PBS中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。在圈内加入自发荧光淬灭剂5min,流水冲洗10min。

      8、封片:切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。

      9、镜检拍照:切片于荧光显微镜下观察并采集图像。(DAPI紫外激发波长330-380 nm,发射波长420 nm,发蓝光;Alexa Fluor®488激发波长465-495 nm,发射波长515-555 nm,发绿光;CY3激发波长510-560,发射波长590 nm,发红光)

      10、石蜡切片免疫荧光结果判读

      DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色,阳性表达为相应荧光素标记的红光和绿光,红光为Fast Myosin Skeletal Heavy chain antibody的表达,绿光为Slow Skeletal Myosin Heavy chain antibody的表达。


      注意事项:

      1.实验操作应避光进行(暗环境),操作过程中避免组织干片;

      2.试剂现配现用,PBS洗涤要充分,减少非特异性着色;

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